Cosa fa il primo tutore del “bambino in provetta”?

Cosa fa il primo tutore del “bambino in provetta”?

Il 25 luglio 1978 nacque il primo bambino al mondo nato in provetta, inaugurando un nuovo capitolo nella tecnologia di riproduzione assistita. Gli embriologi sono i primi custodi del “bambino in provetta”, per questo il 25 luglio di ogni anno è definito “Giornata degli embriologi”. I futuri genitori consegnano il loro sperma e i loro ovuli all'embriologo, che se ne prenderà cura con cura ed eseguirà misteriose operazioni per consentire al "bambino in provetta" di svilupparsi in modo sano in un ambiente caldo e numeroso. Volete sapere come si svolge una giornata tipo nella vita di un embriologo? Quali operazioni misteriose vengono eseguite e in quali periodi di tempo? Diamo un'occhiata insieme.

7:20 Controllo di qualità del laboratorio embrionale

Il programma di un anno inizia con la primavera, il programma di una giornata inizia con il mattino e il mattino è il momento migliore per iniziare la giornata. Per garantire al bambino in provetta un buon inizio, l'embriologo verifica al mattino se l'ambiente e le condizioni di vita del bambino in provetta sono i più confortevoli, questo costituisce il controllo di qualità del laboratorio embrionale. I contenuti del controllo di qualità includono principalmente temperatura, umidità, ambiente (COV, contenuto di ossigeno, particelle e batteri, ecc.) del laboratorio embrionale, controllo di qualità dell'incubatrice (temperatura, umidità, contenuto di CO2 e O2, ecc.), temperatura del tavolo operatorio, temperatura del frigorifero, volume di azoto liquido e temperatura del serbatoio di azoto liquido, lotti di reagenti e materiali di consumo, ecc. Dopo che 1-2 embriologi arriveranno al laboratorio embrionale, testeranno gli elementi del controllo di qualità di cui sopra. La temperatura del laboratorio embrionale è di 24-26°C e l'umidità è del 40%-60%; la temperatura dell'incubatrice ad anidride carbonica è di 37°C, la concentrazione di CO2 è del 6% e la concentrazione di O2 è del 5%; la temperatura della piastra calda del tavolo operatorio è controllata a 37-38°C, ecc. Se si riscontra che le condizioni di cui sopra non sono soddisfatte, è necessario regolarle in tempo per fornire al "bambino in provetta" un ambiente di coltura caldo e confortevole per garantire lo sviluppo sano dell'embrione.

7:40 Giorno 1 di fecondazione in vitro dopo il prelievo degli ovociti (D1) Peeling degli ovociti

La fecondazione in vitro è il processo mediante il quale sperma e ovuli si combinano liberamente in una capsula di coltura. Il processo di fusione tra spermatozoo e ovulo digerirà le cellule del cumulo della corona radiata nel complesso del cumulo, mentre le cellule della granulosa periferiche saranno ancora strettamente avvolte attorno all'ovulo. Gli embriologi devono usare un ago per la rimozione delle uova, leggermente più grande del diametro dell'uovo, per soffiare e lavare ripetutamente l'uovo e confermare che le cellule della granulosa attorno all'uovo si siano staccate, facilitando l'osservazione del pronucleo al microscopio.

8:00 Osservazione dell'embrione e della fecondazione

La fecondazione degli spermatozoi e degli ovuli (D1), lo sviluppo dell'embrione nella fase di scissione il terzo giorno (D3) e lo sviluppo dell'embrione nella fase di blastocisti (D5 o D6) devono essere tutti osservati in momenti specifici per facilitare la valutazione delle caratteristiche temporali e spaziali dello sviluppo dell'embrione e la selezione di embrioni di alta qualità per il congelamento o il trapianto. Dopo 17-20 ore dalla fecondazione, osservare il pronucleo al microscopio invertito in D1 per determinare se lo sperma e l'ovulo sono stati fecondati. L'uovo fecondato con due pronuclei e corpi bipolari contemporaneamente è considerato fecondato normalmente e viene trasferito nel terreno di coltura G-1 per un'ulteriore coltura. Se compaiono tre pronuclei, la fecondazione è considerata anomala e verrà scartata direttamente; se compare un pronucleo, questo continuerà a essere coltivato durante il ciclo di fecondazione in vitro per osservare il successivo sviluppo embrionale. Se durante il ciclo di iniezione intracitoplasmatica dello spermatozoo (ICSI) dovesse comparire un pronucleo, verrà scartato direttamente. Oltre a valutare lo stato di fecondazione dello spermatozoo e dell'ovulo, il pronucleo verrà valutato anche in base alla sua posizione nell'ovulo, alle posizioni relative dei due pronuclei, al numero di nucleoli nel pronucleo e alla distribuzione spaziale. Normalmente gli ovuli fecondati vengono coltivati ​​in G-1 fino a D3 e gli embrioni D3 vengono valutati in base alla velocità di divisione dei blastomeri, al numero di blastomeri e al grado di frammentazione. Gli embrioni di alta qualità vengono selezionati e inseriti nel terreno di coltura G-2 per continuare la coltura fino alla blastocisti, oppure congelati o trapiantati. Se la paziente sceglie di continuare la coltura della blastocisti in D3, è necessario osservare la blastocisti in D5 o D6, classificarla in base al grado di espansione, al numero di cellule della massa cellulare interna e al numero di cellule del trofoblasto, selezionare blastocisti di alta qualità per la crioconservazione o il trapianto e scartare il resto degli embrioni.

8:00 Raccolta delle uova

Preriscaldare il terreno tamponato con fosfato G-MOPS-PLUS per la raccolta delle uova in un'incubatrice a 37°C e priva di CO2 per 30 minuti in anticipo. Il medico ha aspirato il fluido follicolare sotto la guida dell'ultrasuono B e l'embriologo ha rapidamente trasferito il fluido follicolare nella capsula di coltura e ha osservato il complesso del cumulo al microscopio stereoscopico. Il complesso del cumulo è stato prelevato e lavato due volte con G-MOPS-PLUS e una volta con G-IVF, quindi posto nel terreno di coltura G-IVF prebilanciato e coltivato in un'incubatrice a 37°C, 6% di CO2 e 5% di O2 per un uso successivo.

8:30, 13:30 Rianimazione

Dopo l'arrivo al laboratorio embrionale al mattino, l'embriologo prepara il liquido di rianimazione (compreso TS DS WS1 WS2) per la rianimazione. Il TS viene preriscaldato in un'incubatrice a 37°C, priva di CO2, per 30 minuti, mentre gli altri tre fluidi di rianimazione vengono mantenuti a temperatura ambiente per 30 minuti. L'operazione di rianimazione mattutina inizia alle 8:30. La maggior parte dei pazienti rianimati al mattino presso il nostro centro vengono rianimati al mattino e sottoposti a coltura fino al trasferimento della blastocisti nel pomeriggio, pertanto si raccomanda ai pazienti di arrivare al centro prima delle 8:30 per completare il lavoro di verifica, per evitare di compromettere la successiva coltura e il trapianto. Alle 13:30 del pomeriggio, un piccolo numero di pazienti ha rianimato embrioni allo stadio di scissione D3.

8:30, 13:30 Trapianto

Il trapianto può iniziare alle 8:30 o alle 13:30. Perché ci sono due momenti diversi per il trapianto? C'è qualche differenza? I trapianti delle 8:30 includono trapianti freschi, trapianti di embrioni D3 e trapianti di coltura di blastocisti e scongelamento di embrioni D3. Il trapianto delle 13:30 è destinato principalmente alle blastocisti rianimate al mattino e coltivate in vitro per più di 2 ore.

9:30 ICSI D0 sbucciatura uova

La raccolta delle uova inizia alle 8:00. Per le pazienti sottoposte a cicli ICSI, dopo la rimozione del complesso del cumulo e la sua coltura in G-IVF per 1 o 2 ore, è possibile eseguire l'operazione di stripping degli ovociti, spesso chiamata dagli embriologi "egg stripping". Lo stripping dell'uovo è il processo di digestione del complesso del cumulo con una certa concentrazione di ialuronidasi e di soffiaggio e lavaggio ripetuto dell'uovo con un ago per lo stripping dell'uovo leggermente più grande del diametro dell'uovo stesso, per staccare le cellule del cumulo e le cellule della granulosa. Dopo aver rimosso l'ovulo, l'embriologo deve osservare al microscopio se l'ovulo contiene il primo globulo polare. Se è presente un primo globulo polare, l'ovulo è un ovulo maturo (MII) e viene inserito in una goccia di G-IVF per un'ulteriore coltura. L'operazione ICSI viene eseguita alle 13:30 del pomeriggio. Se nell'uovo non è presente alcun primo corpo polare, si tratta di un uovo immaturo (MI, GV) e verrà scartato.

9:45 Congelato

7:40 Dopo l'osservazione dell'embrione, l'embriologo fornirà ai medici un feedback sugli embrioni di alta qualità nei giorni D3, D5 e D6. I medici sceglieranno la destinazione degli embrioni di alta qualità in base alle condizioni individuali dei pazienti e ai loro desideri: congelamento, trapianto o coltura a blastocisti. Il medico consegnerà poi le istruzioni all'embriologo, che le seguirà per crioconservare gli embrioni di alta qualità.

10:00 Cambia mezzo

L'embriologo fornirà al medico un feedback sugli embrioni di alta qualità in D3. I medici decideranno se continuare la coltura di blastocisti per ottenere embrioni di alta qualità in base alle condizioni del singolo paziente e ai suoi desideri. Gli embriologi seguono le istruzioni del medico per la coltura della blastocisti ed eseguono un'operazione di cambio del mezzo sugli embrioni di alta qualità, ovvero sostituiscono gli embrioni di alta qualità dal mezzo di coltura G-1 al mezzo di coltura G-2 e li coltivano in un'incubatrice a 37°C, 6% di CO2 e 5% di O2 per 2 o 3 giorni.

10:00 Biopsia

Lo screening/diagnosi genetica preimpianto viene utilizzato principalmente per pazienti affetti da malattie monogeniche, ripetuti fallimenti di impianto, aborti spontanei ricorrenti ed età avanzata. Con il progresso delle tecniche di biopsia e di analisi genetica, la percentuale di questi pazienti con ciclo mestruale sta gradualmente aumentando. Attualmente, la principale tecnica di biopsia utilizzata dagli embriologi è la tecnica della biopsia delle cellule trofoblastiche della blastocisti, che utilizza un micromanipolatore per aspirare da 3 a 5 cellule trofoblastiche per il sequenziamento di singole cellule allo scopo di analizzare il numero, la struttura, ecc. dei cromosomi. Dopo la biopsia embrionale, tutti gli embrioni vengono congelati e, una volta ottenuti i risultati della biopsia, vengono selezionati gli embrioni normali per il trapianto.

11:20 Fecondazione in vitro (FIV)

Dopo 38-40 ore dall'iniezione di HCG, gli embriologi possono procedere alla fecondazione in vitro. Gli embriologi mescoleranno e coltiveranno gli ovuli e gli spermatozoi trattati in una certa proporzione, consentendo allo sperma e agli ovuli di combinarsi liberamente per completare il processo di fecondazione tramite fecondazione in vitro.

13:30 ICSI

L'operazione di iniezione del singolo spermatozoo nell'ovulo nel ciclo ICSI inizia alle 13:30, con un singolo spermatozoo iniettato nell'ovulo tramite un sistema di micromanipolazione. Dopo l'ICSI, gli ovuli MII iniettati con lo sperma sono stati trasferiti direttamente nel terreno di coltura G-1 e coltivati ​​in un'incubatrice a 37°C, 6% di CO2 e 5% di O2 fino all'osservazione dei pronucleari D1.

16:30 Uova e sbucciatura anticipata

Dopo 4-6 ore dalla fecondazione tramite fecondazione in vitro, l'embriologo rimuoverà l'ovulo ed eseguirà lo stripping precoce. Lo scopo è determinare lo stato di fecondazione dello spermatozoo e dell'ovulo in base all'espulsione del secondo globulo polare; il secondo è quello di migliorare l'ambiente di coltura dello sperma e dell'ovulo. Se la paziente soffre di infertilità primaria e si tratta del primo ciclo di fecondazione in vitro, verranno prelevati prematuramente da 2 a 3 ovuli. Se 1 o 2 uova presentano corpi bipolari, significa che la fecondazione è avvenuta correttamente. Se la situazione della fecondazione non è buona, la situazione della fecondazione verrà nuovamente osservata alle ore 18:00. Se non si riscontra alcun miglioramento, verrà eseguita immediatamente una ICSI correttiva.

13:30 Preparare la soluzione e applicare un'etichetta a ciascun paziente sulla piastra di coltura

Il terreno di coltura utilizzato per la fecondazione degli ovociti, la coltura e la coltura degli embrioni deve essere bilanciato in un incubatore a 37°C e 6% di CO2 per più di 8 ore. Pertanto, il terreno di coltura utilizzato per la raccolta degli ovociti e la coltura degli embrioni il giorno successivo deve essere preparato in anticipo. Oltre a preparare il liquido utilizzato per la coltura bilanciata, su ogni piastra di coltura devono essere apposti un chip e un codice a barre di verifica corrispondente al numero della clinica del paziente, per facilitare la verifica durante l'operazione.

Oltre al lavoro di cui sopra, gli embriologi sono anche responsabili della stesura e della registrazione delle informazioni di registrazione della cartella clinica, dell'inserimento di vari dati di controllo qualità e di laboratorio sugli embrioni, della manutenzione degli strumenti e delle attrezzature sperimentali, ecc. Gli embriologi che si prendono silenziosamente cura del "bambino in provetta" dietro le quinte proteggono ogni uovo fecondato ed embrione e tengono il "bambino in provetta" nelle loro mani, portando con sé il punto di partenza della vita.