Scritto da | Fanpu La sera del 7 ottobre, ora di Pechino, il Premio Nobel per la chimica 2020 è stato assegnato a Emmanuelle Charpentier e Jennifer A. Doudna in riconoscimento del loro contributo all'editing genetico. Informazioni sul vincitore: La dott.ssa Emmanuelle Charpentier è una microbiologa francese e attualmente direttrice dell'Istituto per la biologia delle infezioni presso il Max Planck Institute in Germania. Nello sviluppo di CRISPR, il suo contributo principale è stata la scoperta che l'attività della proteina Cas9 dipende dal tracrRNA. La dott.ssa Jennifer A. Doudna è professoressa di chimica, biologia molecolare e biologia cellulare presso l'Università di Berkeley, ricercatrice dell'Howard Hughes Medical Institute e membro della National Academy of Sciences. Insieme alla Dott.ssa Emmanuelle Charpentier, ha scoperto la funzione di taglio di Cas9 e la funzione di posizionamento di crRNA, e ha fuso crRNA e tracrRNA in RNA guida a singolo filamento (sgRNA). Gli esperti in settori correlati hanno analizzato il fatto che lo scienziato cinese Zhang Feng è stato il primo a utilizzare CRISPR-Cas9 per ottenere l'editing genetico nelle cellule eucariotiche, ma non è riuscito a vincere il premio. Ciò potrebbe essere dovuto al fatto che il lavoro di Zhang Feng è meno originale e il suo contributo è più simile a quello di Cohen e Boyer nella ricombinazione cellulare (il premio per la chimica del 1980 è stato assegnato a Berger per la ricombinazione artificiale); e il Premio per la Chimica presta maggiore attenzione ai risultati sperimentali in vitro, e la sua scoperta si riflette principalmente nelle cellule. CRISPR è già una tecnologia di editing genetico molto diffusa in ambito biomedico. Negli ultimi anni, il rapido sviluppo di questa tecnologia è stato promosso e applicato a molti campi quali biologia, medicina, agricoltura e ambiente, dando vita a una serie di miracoli nella ricerca scientifica, in particolare nel trattamento delle malattie genetiche, nello screening e nel rilevamento dei geni correlati alle malattie, nel trattamento dei tumori, nella trasformazione di animali e piante, nella prevenzione e nel controllo dei microrganismi patogeni e in altri campi. Ha un potenziale enorme e avrà un profondo impatto sul mondo intero.
Gli scienziati hanno sfruttato questa funzione di CRISPR per trasformarlo in un nuovo, rivoluzionario strumento molecolare. Grazie alla sua capacità di localizzare e tagliare con precisione qualsiasi tipo di materiale genetico, gli scienziati possono decifrare più facilmente il codice vitale di qualsiasi organismo sulla Terra (inclusi gli esseri umani).
Figura 1: Breve storia dello sviluppo di CRISPR La scoperta e la denominazione di CRISPR risalgono al 1987, quando il gruppo di ricerca Nakata dell'Università di Osaka in Giappone scoprì alcune sequenze ripetitive anomale nei batteri durante l'analisi dell'Escherichia coli [2]. Ma a quel tempo non si sapeva quale fosse la funzione esatta di queste sequenze ripetitive, e non avevano nemmeno un nome formale. Solo alla fine degli anni '80 Francisco Mojica dell'Università di Alicante in Spagna scoprì una sequenza ripetitiva simile in una specie di archea [3], che suscitò il suo grande interesse. Nelle ricerche successive, ha continuato a cercare strutture simili nei microrganismi e nel 2000 aveva trovato sequenze simili in più di 20 specie microbiche diverse[4]. Nel 2002, Ruud Jansen dell'Università di Utrecht nei Paesi Bassi scoprì che il numero di basi nelle sequenze ripetitive variava notevolmente tra le specie e che tali sequenze esistevano solo nei procarioti. Per standardizzare meglio la ricerca correlata, hanno chiamato congiuntamente questa sequenza ripetitiva "CRISPR". . Molti geni correlati a CRISPR sono denominati famiglia Cas (CRISPR-associata)[5]. Ruolo biologico del sistema CRISPR-CAS Nel 2005, la ricerca CRISPR ha portato a un'importante scoperta. Due gruppi di ricerca (Mojica e Pourcel) hanno osservato che le sequenze spaziatrici tra le sequenze ripetute CRISPR non provenivano dai procarioti stessi, ma da plasmidi o virus [6-7]. Mojica ha quindi proposto l'ipotesi che CRISPR sia un sistema immunitario adattativo. Nello stesso anno, il gruppo di ricerca di Bolotin scoprì Cas9 nello Streptococcus thermophilus e predisse che questa grande proteina aveva attività nucleasica. Hanno anche scoperto che le sequenze spaziatrici omologhe ai virus hanno tutte una coda simile, chiamata sequenza PAM (motivo adiacente al protospacer), che è fondamentale per il riconoscimento della sequenza bersaglio. Ispirato da questa ipotesi, il microbiologo francese Rodolphe Barragou, che all'epoca lavorava per la famosa azienda di yogurt Danisco, decise di verificarla per risolvere il problema dell'infezione da parte dei fagi e della morte dello Streptococcus thermophilus, che comprometteva la produzione di yogurt. Nel 2007 hanno dimostrato sperimentalmente che il sistema CRISPR è effettivamente un sistema immunitario adattativo. Dopo essere stato invaso da un virus, lo Streptococcus thermophilus integra una nuova sequenza spaziatrice dal genoma del fago, che consente ai batteri di resistere all'attacco quando lo stesso virus invade nuovamente[8]. La proteina Cas9 potrebbe essere necessaria per la generazione di questa immunità. Questa è la prima volta che è stato confermato sperimentalmente che CRISPR-Cas è un sistema immunitario acquisito dai batteri. La conferma della funzione biologica di CRISPR-CAS ha fatto sì che molti team di ricerca si rendessero conto dell'importanza di questo sistema. Successivamente, molti team di ricerca hanno iniziato ad approfondire i dettagli del meccanismo mediante il quale il sistema CRISPR-Cas interferisce con i batteriofagi. Nel 2008, il gruppo di ricerca di John van der Oost ha scoperto nell'Escherichia coli che la sequenza spaziatrice del batteriofago veniva trascritta in piccoli RNA, diventando CRISPR RNA (crRNA) e guidando la proteina Cas verso il DNA bersaglio. Nello stesso anno, Marraffini e Sontheimer dimostrarono che la molecola bersaglio del sistema CRISPR-Cas è il DNA, non l'RNA. Hanno anche sottolineato chiaramente che se questo sistema viene trasferito a sistemi non batterici, potrebbe diventare un potente sistema di strumenti[9-10]. Ciò ha posto le basi per la successiva modifica genetica. Nel dicembre 2010, il team di Moineau ha dimostrato che CRISRP-Cas9 taglia con precisione a monte della sequenza PAM per creare rotture a doppio filamento nel DNA. Come caratteristica importante del sistema CRISPR di tipo II, Cas9 è l'unica proteina richiesta per il taglio e lavora insieme ai crRNA per mediare la funzione di interferenza di CRISPR-Cas9[11]. Nel 2011, il gruppo di ricerca di Charpentier ha sequenziato piccoli RNA nello Streptococcus pyogenes e ha scoperto che oltre al crRNA, esisteva un altro piccolo RNA chiamato tracrRNA. Il tracrRNA completa la sequenza ripetuta nel crRNA attraverso 24 nucleotidi per formare un doppio filamento, guidando Cas9 verso il DNA bersaglio. A questo punto, il puzzle del meccanismo naturale di interferenza CRISPR-Cas9 è sostanzialmente completo [12]. L'avvento della tecnologia di editing genetico CRISPR-CAS Nel 2012, il team di Charpentier e Doudna ha collaborato non solo per dimostrare che Cas9 ha la capacità di tagliare il DNA a doppio filamento, ma anche di collegare tracrRNA e crRNA in sgRNA (singolo RNA guida) e ha confermato in esperimenti in vitro che sgRNA può anche guidare la proteina Cas9 nel completare il taglio del DNA a doppio filamento. Possono controllare il sito di destinazione di Cas9 modificando la sequenza del crRNA[13]. Successivamente il team di Siksnys ha riportato gli stessi risultati. Questa scoperta non rappresenta solo una pietra miliare nel campo del sistema immunitario acquisito dai batteri, ma apre anche un nuovo capitolo nella tecnologia di editing genetico CRISPR-CAS. Ben presto, all'inizio del 2013, diversi articoli applicarono con successo il sistema CRISPR-Cas alle cellule dei mammiferi. Tra questi, il gruppo di ricerca della Chiesa ha progettato un sistema CRISPR-Cas di tipo II, che ha preso di mira con successo sequenze specifiche nelle cellule umane 293T, nelle cellule K562 e nelle cellule staminali pluripotenti indotte progettando sgRNA, e più gRNA potrebbero ottenere l'editing multiplo del gene bersaglio[14]. Il laboratorio di Zhang Feng ha dimostrato che il sistema CRISPR-Cas9 può eseguire tagli precisi e specifici in cellule umane e di topo e ha mutato Cas9 in una nickasi, promuovendo il processo di riparazione dell'omologia[15]. Il gruppo di ricerca di Qi ha creato il sistema CRISPRi e ha ottenuto la mutagenesi simultanea sito-diretta di più geni (Tet1, Tet2, Tet3, Sry e Uty) utilizzando più sgRNA[16]. Wu e altri hanno utilizzato il sistema CRISPR-Cas9 per eseguire la terapia genica su topi con una mutazione dominante Crygc e hanno ottenuto una prole sana, fornendo una base per l'uso del sistema CRISPR-Cas9 per la terapia genica delle malattie genetiche[17]. Di conseguenza, la ricerca e l'applicazione del sistema CRISPR nei campi dell'editing del sito genico, dello screening del genoma, della regolazione della trascrizione genica, dell'imaging del genoma, della diagnosi e del trattamento genico e delle applicazioni ecologiche in una varietà di organismi hanno iniziato a crescere in modo esponenziale. Negli anni successivi, il laboratorio di Zhang Feng ha ulteriormente ampliato il sistema di editing genetico CRISPR-CAS e ha scoperto non solo il sistema CRISPR-Cas con grandi vantaggi in termini di specificità e editing multi-genico: CRISPR-Cpf1[18], ma anche gli enzimi CRISPR Cas13a (C2c2)[19] e Cas13b[20] con funzione RNasi. Nel 2017, diversi articoli hanno studiato il meccanismo d'azione del sistema CRISPR-Cas13, la sua applicazione nella diagnosi clinica e la sua capacità di colpire l'RNA nelle cellule dei mammiferi.
Sebbene DETECTR e SHERLOCK abbiano dimostrato le loro potenti capacità diagnostiche, i ricercatori devono ancora lavorare molto per garantire l'accuratezza della diagnosi prima che possano essere impiegati in ambito clinico. Riteniamo che questi nuovi strumenti diagnostici ridefiniranno le future tecnologie diagnostiche, in particolare fornendo un valido aiuto nella diagnosi delle infezioni virali nei paesi in via di sviluppo, dove le condizioni sanitarie sono relativamente scarse e i virus sono altamente diffusi. . Riferimenti 1. Doudna JA, Charpentier E. Editing del genoma. La nuova frontiera dell'ingegneria genomica con CRISPR-Cas9. Scienza. 28 novembre 2014;346(6213):1258096. doi: 10.1126/science.1258096. Codice PMI: 25430774. 2. Ishino Y, Shinagawa H, Makino K, Amemura M, Nakata A. Sequenza nucleotidica del gene iap, responsabile della conversione dell'isoenzima della fosfatasi alcalina in Escherichia coli, e identificazione del prodotto genico. J Batteriolo. Dicembre 1987;169(12):5429-33. doi: 10.1128/jb.169.12.5429-5433.1987. Italiano: Italiano: 3. Lander ES. Gli eroi di CRISPR. Cella. 14 gennaio 2016;164(1-2):18-28. autore: doi: 10.1016/j.cell.2015.12.041. Numero PMID: 26771483. 4. Mojica FJ, Díez-Villaseñor C, Soria E, Juez G. Significato biologico di una famiglia di ripetizioni regolarmente distanziate nei genomi di Archaea, batteri e mitocondri. Microbiologia Mol. Aprile 2000;36(1):244-6. doi: 10.1046/j.1365-2958.2000.01838.x. Numero di registrazione PMI: 10760181. 5. Jansen R, Embden JD, Gaastra W, Schouls LM. Identificazione dei geni associati alle ripetizioni del DNA nei procarioti. Microbiologia Mol. Marzo 2002;43(6):1565-75. doi: 10.1046/j.1365-2958.2002.02839.x. Numero PMID: 11952905. 6. Mojica FJ, Díez-Villaseñor C, García-Martínez J, Soria E. Le sequenze interposte di ripetizioni procariotiche regolarmente distanziate derivano da elementi genetici estranei. J Mol Evol. Febbraio 2005;60(2):174-82. doi: 10.1007/s00239-004-0046-3. Numero di registrazione PMI: 15791728. 7. Pourcel C, Salvignol G, Vergnaud G. Gli elementi CRISPR in Yersinia pestis acquisiscono nuove ripetizioni tramite l'assorbimento preferenziale del DNA del batteriofago e forniscono ulteriori strumenti per studi evolutivi. Microbiologia. Marzo 2005;151(Pt 3):653-663. dominio: 10.1099/mic.0.27437-0 Numero di registrazione PMI: 15758212. POURCEL C, SALVIGNOL G, VERGNAUD G. Gli elementi CRISPR in Yersinia pestis acquisiscono nuove ripetizioni tramite l'assorbimento preferenziale del DNA del batteriofago e forniscono strumenti aggiuntivi per studi evolutivi[J]. Microbiologia, 2005, 15l(3): 653-663. 8. Barrangou R, Fremaux C, Deveau H, Richards M, Boyaval P, Moineau S, Romero DA, Horvath P. CRISPR fornisce resistenza acquisita contro i virus nei procarioti. Scienza. 23 marzo 2007;315(5819):1709-12. doi: 10.1126/science.1138140. Numero di registrazione PMI: 17379808. 9. Marraffini LA, Sontheimer EJ. L'interferenza CRISPR limita il trasferimento genico orizzontale negli stafilococchi prendendo di mira il DNA. Scienza. 19 dicembre 2008;322(5909):1843-5. doi: 10.1126/science.1165771. Numero di registrazione PMI: 19095942; Italiano: 10. Abbott A. Il rivoluzionario silenzioso: come la co-scoperta di CRISPR ha cambiato radicalmente la vita di Emmanuelle Charpentier. Natura. 28 aprile 2016;532(7600):432-4. doi: 10.1038/532432a. Numero di registrazione PMI: 27121823. 11. Garneau JE, Dupuis MÈ, Villion M, Romero DA, Barrangou R, Boyaval P, Fremaux C, Horvath P, Magadán AH, Moineau S. Il sistema immunitario batterico CRISPR/Cas scinde il batteriofago e il DNA plasmidico. Natura. 4 novembre 2010;468(7320):67-71. doi: 10.1038/nature09523. Numero PMID: 21048762. 12. Deltcheva E, Chylinski K, Sharma CM, Gonzales K, Chao Y, Pirzada ZA, Eckert MR, Vogel J, Charpentier E. Maturazione dell'RNA CRISPR mediante piccolo RNA trans-codificato e fattore ospite RNasi III. Natura. 31 marzo 2011;471(7340):602-7. doi: 10.1038/nature09886. Numero di registrazione PMI: 21455174; Italiano: 13. Jinek M, Chylinski K, Fonfara I, Hauer M, Doudna JA, Charpentier E. Un'endonucleasi del DNA programmabile guidata da doppio RNA nell'immunità batterica adattativa. Scienza. 17 agosto 2012;337(6096):816-21. doi: 10.1126/science.1225829. Epub 28 giugno 2012. PMID: 22745249; Italiano: 14. Cong L, Ran FA, Cox D, Lin S, Barretto R, Habib N, Hsu PD, Wu X, Jiang W, Marraffini LA, Zhang F. Ingegneria del genoma multiplex utilizzando sistemi CRISPR/Cas. Scienza. 15 febbraio 2013;339(6121):819-23. doi: 10.1126/science.1231143. Epub 2013 3 gennaio. PMID: 23287718; Italiano: 15. Mali P, Yang L, Esvelt KM, Aach J, Guell M, DiCarlo JE, Norville JE, Church GM. Ingegneria del genoma umano guidata dall'RNA tramite Cas9. Scienza. 15 febbraio 2013;339(6121):823-6. doi: 10.1126/science.1232033. Epub 2013 3 gennaio. PMID: 23287722; Italiano: 16. Pennisi E. La mania CRISPR. Scienza. 23 agosto 2013;341(6148):833-6. doi: 10.1126/science.341.6148.833. Numero di registrazione PMI: 23970676. 17. Wu Y, Liang D, Wang Y, Bai M, Tang W, Bao S, Yan Z, Li D, Li J. Correzione di una malattia genetica nel topo tramite l'uso di CRISPR-Cas9. Cellula Cellula Staminale. 5 dicembre 2013;13(6):659-62. doi: 10.1016/j.stem.2013.10.016. Numero PMID: 24315440. 18. Zetsche B, Gootenberg JS, Abudayyeh OO, Slaymaker IM, Makarova KS, Essletzbichler P, Volz SE, Joung J, van der Oost J, Regev A, Koonin EV, Zhang F. Cpf1 è una singola endonucleasi guidata da RNA di un sistema CRISPR-Cas di classe 2. Cella. 22 ottobre 2015;163(3):759-71. autore: doi: 10.1016/j.cell.2015.09.038. Epub 25 settembre 2015. PMID: 26422227; Italiano: 19. Gootenberg JS, Abudayyeh OO, Kellner MJ, Joung J, Collins JJ, Zhang F. Piattaforma di rilevamento degli acidi nucleici multiplexata e portatile con Cas13, Cas12a e Csm6. Scienza. 27 aprile 2018;360(6387):439-444. doi: 10.1126/science.aaq0179. Epub 2018 15 febbraio. PMID: 29449508; Italiano: 20. Cox DBT, Gootenberg JS, Abudayyeh OO, Franklin B, Kellner MJ, Joung J, Zhang F. Editing dell'RNA con CRISPR-Cas13. Scienza. 24 novembre 2017;358(6366):1019-1027. doi: 10.1126/science.aaq0180. Epub 25 ottobre 2017. PMID: 29070703; Italiano: 21. Long C, Amoasii L, Mireault AA, McAnally JR, Li H, Sanchez-Ortiz E, Bhattacharyya S, Shelton JM, Bassel-Duby R, Olson EN. L'editing genomico postnatale ripristina parzialmente l'espressione della distrofina in un modello murino di distrofia muscolare. Scienza. 22 gennaio 2016;351(6271):400-3. doi: 10.1126/science.aad5725. Epub 31 dicembre 2015. PMID: 26721683; Italiano: 22. Ridler C. La terapia CRISPR si dimostra promettente nella distrofia muscolare di Duchenne. Direttore Scientifico Nat Rev Neurol. Novembre 2018;14(11):632-633. doi: 10.1038/s41582-018-0078-8. Numero di registrazione PMI: 30237553. 23. Burr ML, Sparbier CE, Chan YC, Williamson JC, Woods K, Beavis PA, Lam EYN, Henderson MA, Bell CC, Stolzenburg S, Gilan O, Bloor S, Noori T, Morgens DW, Bassik MC, Neeson PJ, Behren A, Darcy PK, Dawson SJ, Voskoboinik I, Trapani JA, Cebon J, Lehner PJ, Dawson MA. CMTM6 mantiene l'espressione di PD-L1 e regola l'immunità antitumorale. Natura. 7 settembre 2017;549(7670):101-105. doi: 10.1038/nature23643. Epub 2017 16 agosto. PMID: 28813417; Italiano: 24. Chen JS, Ma E, Harrington LB, Da Costa M, Tian 15 febbraio 2018. PMID: 29449511; Italiano: 25. Gootenberg JS, Abudayyeh OO, Lee JW, Essletzbichler P, Dy AJ, Joung J, Verdine V, Donghia N, Daringer NM, Freije CA, Myhrvold C, Bhattacharyya RP, Livny J, Regev A, Koonin EV, Hung DT, Sabeti PC, Collins JJ, Zhang F. Rilevazione dell'acido nucleico con CRISPR-Cas13a/C2c2. Scienza. 28 aprile 2017;356(6336):438-442. doi: 10.1126/science.aam9321. Epub 2017 13 aprile. PMID: 28408723; Italiano: |
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