Un caso positivo a Zhengzhou è risultato negativo al test dell'acido nucleico per 12 volte consecutive. Quanti test sugli acidi nucleici dovrebbero essere eseguiti per garantire la massima tranquillità?

Di recente, è stato scoperto un caso positivo a Zhengzhou, dopo che 12 test consecutivi dell'acido nucleico sono risultati negativi dopo 9 giorni di isolamento. Perché alcune persone sfuggono al test degli acidi nucleici? Quante volte dobbiamo fare dei test per sentirci a nostro agio?

Intervista agli esperti:

Zhang Yongxiang (Primario del Dipartimento di Pneumologia dell'Ospedale Popolare del Distretto di Daxing di Pechino)

Alle ore 20:00 del 16 novembre, una conferenza stampa sulla prevenzione e il controllo dell'epidemia di polmonite da nuovo coronavirus a Zhengzhou, nella provincia di Henan, ha riferito che sono stati segnalati complessivamente 53 casi confermati in questa tornata epidemica. Tra questi, il caso n. 53, aggiunto di recente il 14 novembre, è stato scoperto dopo 9 giorni di isolamento centralizzato. In precedenza, dal 3 novembre erano stati effettuati 12 test consecutivi dell'acido nucleico, tutti con esito negativo.

Questo caso dimostra ancora una volta che un numero esiguo di persone infette ha un lungo periodo di incubazione e che la prevenzione e il controllo dell'epidemia non possono essere presi alla leggera. Perché alcune persone sfuggono al test degli acidi nucleici? Quante volte dobbiamo fare dei test per sentirci a nostro agio?

Come determinare la positività del test dell'acido nucleico?

Ci sono voluti 12 test dell'acido nucleico per risultare positivi. È possibile che questa tecnologia in grado di far "apparire" il nuovo coronavirus abbia davvero fallito? Ovviamente no!

Wang Guiqiang, presidente della divisione malattie infettive dell'Associazione medica cinese e direttore del dipartimento malattie infettive del primo ospedale dell'Università di Pechino, ha affermato in un'intervista ai media che la stabilità dei test sugli acidi nucleici è buona. Le cosiddette situazioni non rilevabili o falsi negativi o falsi positivi si verificano principalmente perché qualsiasi metodo di rilevamento presenta un problema di sensibilità. Poiché esistono differenze nei principi e nelle pratiche dei test dell'acido nucleico per il nuovo coronavirus, esiste la possibilità che i test siano "imprecisi".

Zhang Yongxiang, primario del reparto di pneumologia dell'ospedale popolare del distretto di Daxing di Pechino, ha dichiarato ai giornalisti che il nuovo coronavirus, come il coronavirus della SARS, è composto da RNA (acido ribonucleico), proteine, ecc., e lo strato più esterno è composto da lipidi e glicoproteine. L'RNA si degrada facilmente (distruzione di alcuni frammenti e catene di RNA all'interno della cellula) e il capside proteico avvolge l'RNA al suo interno, proteggendolo insieme al rivestimento. Il nuovo coronavirus invade le cellule attraverso i recettori presenti sulla superficie di specifiche cellule, causando l'infezione, e utilizza le cellule infette per replicarsi e proliferare.

▲Foto del nuovo coronavirus al microscopio (immagine da Internet)

Pertanto, gli operatori sanitari possono raccogliere campioni di cellule da parti specifiche del corpo umano e verificare se contengono RNA virale, per confermare se l'organismo è infetto.

L'acido nucleico dell'RNA è composto da quattro basi diverse. Se le quattro basi vengono disposte a coppie, si otterranno otto forme. Esistono 256 modi per disporre le basi in quattro siti collegati. Più basi compongono l'RNA, più complessa è la combinazione. Il nuovo coronavirus ha decine di migliaia di basi. L'acido nucleico del virus è come la nostra carta d'identità, ovvero la sua identità unica. Lo scopo del test dell'acido nucleico è identificare "l'identità" del nuovo coronavirus.

Prendendo come esempio la tecnologia PT-PCR attualmente comunemente utilizzata, supponiamo che qualcuno sia stato infettato dal COVID-19 e debba essere sottoposto ad accertamenti. Il personale medico raccoglierà le cellule portatrici del virus, le trasporterà in laboratorio, le inattiverà completamente, distruggerà la loro struttura originale, esporrà l'acido nucleico e poi utilizzerà la sonda nel reagente per vedere se può essere altamente compatibile con alcune parti chiave dell'RNA. Ogni corrispondenza riuscita genererà un segnale fluorescente corrispondente, che indica che la "carta d'identità genetica" è stata identificata, e il rilevatore PCR registrerà il valore del segnale fluorescente in tempo reale. Dopo ripetuti controlli, l'intensità della fluorescenza diventa sempre più elevata e sul software di rilevamento apparirà una curva ascendente, indicando che il test è positivo, a dimostrazione del fatto che il campione contiene l'RNA del nuovo coronavirus.

Cosa causa "incertezza"?

Zhang Yongxiang ha affermato che il test dell'acido nucleico virale è una delle condizioni necessarie per una diagnosi positiva. Da un punto di vista tecnico, il test degli acidi nucleici è un flusso di lavoro in più fasi. L'intero test include campionamento, trasporto, inattivazione, estrazione dell'acido nucleico, reazione PCR, ecc. Un funzionamento non corretto o problemi con i reagenti o le apparecchiature in qualsiasi fase possono dare origine a campioni "falsi negativi" o "falsi positivi".

Durante l'effettivo funzionamento del test dell'acido nucleico, se si verificano problemi di qualità con il kit di test dell'acido nucleico o con la provetta di campionamento, ciò porterà a misurazioni sostanzialmente imprecise; Inoltre, se la quantità di soluzione di conservazione del virus estratta è troppo piccola e il volume della soluzione di eluizione dell'acido nucleico aggiunta al sistema PCR per il test è troppo basso, vi sarà il rischio di perdita di acido nucleico, con conseguente deviazione dei risultati dal valore reale.

L'attuale test dell'acido nucleico per il nuovo coronavirus richiede un tampone faringeo o un tampone nasofaringeo. Per una corretta raccolta del tampone faringeo è necessario pulire contemporaneamente sia le tonsille faringee sia la parete posteriore della faringe. Il tampone nasofaringeo raccolto deve essere inserito delicatamente nel passaggio nasale, rimanere sul naso e sul palato per un momento e poi ruotare lentamente verso l'esterno. In passato, la raccolta di campioni da questi due luoghi veniva raramente eseguita nella pratica clinica, quindi il personale addetto al campionamento ha sostanzialmente avviato la formazione e l'operazione centralizzate solo nel 2020. Una formazione inadeguata del personale è destinata a portare a operazioni incoerenti, che possono anche portare a risultati incoerenti dei test dell'acido nucleico per la stessa persona ogni volta.

▲I collaudatori identificano i campioni raccolti in laboratorio (Foto/Visual China)

Studi hanno dimostrato che il campione respiratorio con il più alto tasso di rilevamento è il liquido di lavaggio broncoalveolare, seguito dal tessuto polmonare, dall'espettorato aspirato o dall'aspirato nasofaringeo e quindi dal tampone nasofaringeo o dal tampone faringeo. Pertanto, sebbene il tampone nasofaringeo o faringeo sia un esame comodo e veloce, non è il metodo più accurato. Se l'infezione del paziente ha raggiunto la fase intermedia o avanzata della malattia, il virus si concentra nelle vie respiratorie inferiori e il rinofaringe non è più la sede principale dell'infezione. Il tampone nasofaringeo o faringeo potrebbe non essere accurato dopo ripetuti test.

Zhang Yongxiang ha detto: "Persone diverse possono avere cariche virali diverse. Se la carica virale è particolarmente alta, ci vorrà meno tempo per rilevarla. Se la carica virale è molto bassa, potrebbe essere più difficile rilevare il risultato".

Infatti, non è difficile immaginare che per lo stesso lotto di campioni sottoposti a test, le sequenze geniche vengano amplificate con lo stesso rapporto multiplo durante la fase di amplificazione del test. Nei campioni che contengono più sequenze di geni virali, dopo l'amplificazione saranno presenti più geni virali. Se testati con un kit di analisi, potrebbero avvicinarsi al limite minimo di rilevamento del kit e risultare più facili da rilevare. Nei campioni con basso contenuto virale, sebbene amplificati allo stesso rapporto multiplo, quando vengono testati con il kit di analisi, i geni virali amplificati sono molto meno numerosi rispetto a quelli dei campioni che contengono più sequenze di geni virali. In altre parole, solo attraverso molteplici test dell'acido nucleico virale possiamo catturare il "pesce scivoloso" portatore di acido nucleico virale.

Una volta un paziente fu sottoposto a cinque test consecutivi dell'acido nucleico, di cui solo uno risultò positivo e gli altri negativi. Dopo aver esaminato la storia clinica del paziente, il medico ha scoperto che era portatore del virus dell'immunodeficienza umana (HIV) e che assumeva da molto tempo farmaci anti-HIV. Il livello del nuovo coronavirus nel suo corpo potrebbe essere stato inferiore al limite di rilevamento a causa dell'effetto dei farmaci, con conseguenti ripetuti test dell'acido nucleico negativi.

Inoltre, anche la contaminazione incrociata tra campioni o la contaminazione da trasporto in laboratorio durante le operazioni del personale addetto alle analisi possono dare luogo a risultati imprecisi. Per un laboratorio clinico standardizzato, esistono rigorose strategie di controllo qualità, che in genere riescono a evitare efficacemente risultati falsi positivi nel rilevamento dell'acido nucleico virale. Anche altri fattori, come i cambiamenti nelle condizioni della malattia, le diverse velocità di progressione della malattia nei pazienti, i tempi e gli intervalli di campionamento, influenzeranno i risultati del test.

Quante volte è necessario effettuare i test dell'acido nucleico per essere "sicuri"?

Quando il giornalista ha intervistato gli esperti, ha scoperto che, a causa dei numerosi fattori che incidono sui test dell'acido nucleico, 1 o 2 o addirittura tre risultati negativi consecutivi non possono garantire che la persona sottoposta al test non sia portatrice del nuovo coronavirus. Tuttavia, per i contatti non stretti, i risultati del test dell'acido nucleico sono più simili a un "superamento", per garantire che possano svolgere determinate attività di raduno di gruppo, quindi in genere il test è sufficiente e, allo stesso tempo, devono anche prestare attenzione alla protezione.

Quindi per le persone comuni non c'è bisogno di ripetere i test. Per gli obiettivi chiave sono necessari test ripetuti. Ad esempio, i contatti stretti potrebbero inizialmente espellere una piccola quantità di virus e il tampone faringeo potrebbe non essere rilevato, ma ciò non significa che non ci sia virus nell'organismo. Pertanto dobbiamo effettuare test multipli. In realtà, un singolo test negativo dell'acido nucleico non è sicuro per i bersagli chiave.

(Immagine da Internet)

Per i casi sospetti o i contatti stretti, potrebbero essere necessari più test se il rischio di malattia non è stato escluso. Secondo la settima edizione del piano di diagnosi e trattamento del nuovo coronavirus, sono richiesti anche lo screening tramite esami del sangue di routine, lesioni a vetro smerigliato nelle TAC polmonari ed eventualmente test per gli anticorpi specifici del nuovo coronavirus (IgG e IgM).

Inoltre, a causa delle differenze individuali, la tolleranza e le condizioni mediche pregresse tra persone diverse avranno un certo impatto sul campionamento. Pertanto, il numero di volte in cui è necessario eseguire il test dell'acido nucleico virale dipende da molti fattori complessivi.

Riferimenti:

1. Zhang Rui, Li Jinming. Come ridurre i falsi negativi nei test sugli acidi nucleici del nuovo coronavirus[J]. Rivista medica cinese, 2020, 100(011): 801-804.

2. Wang Qian, Wang Jianzhong. Medicina clinica di laboratorio[M]. Pechino: People's Medical Publishing House, 2015.

3. Li Jin, Ye Guangming, Chen Liangjun et al. Analisi delle cause e delle contromisure dei risultati falsi negativi nei test sugli acidi nucleici del nuovo coronavirus[J]. Rivista cinese di medicina di laboratorio, 2020, 43(03): 221-225.

4. Wang Da, Dong Liang, Qing Song et al. Idee sbagliate nei test sugli acidi nucleici del nuovo coronavirus[J]. Rivista cinese sulle infezioni ospedaliere, 2020, 30(08):1167-1170.

5. Avviso sulla pubblicazione del piano di diagnosi e trattamento per la polmonite da nuovo coronavirus (versione sperimentale 8)

http://www.nhc.gov.cn/xcs/zhengcwj/202008/0a7bdf12bd4b46e5bd28ca7f9a7f5e5a.shtml

6. Avviso di test dell'acido nucleico COVID-19 presso il Peking Union Medical College Hospital

https://www.pumch.cn/detail/23552.html

Scritto dai giornalisti Song Meng, Lai Tianying e Feng Xiaohong (Medical and Health Group)

Editor grafico/Chen Yongjie Editor nuovi media/Lv Bingxin

Prodotto da: Science Central Kitchen

Prodotto da: Beijing Science and Technology News | Cliente Science Plus

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