Striscio dell'espettorato, coltura dell'espettorato, test di sensibilità ai farmaci: come verificare e testare un'infezione delle vie respiratorie inferiori?

Autore: Lu Binghuai, primario del China-Japan Friendship Hospital

Revisore: Xiao Dan, Professore dell'Ospedale dell'amicizia Cina-Giappone

Per le infezioni respiratorie, quanto più i campioni raccolti per gli esami di laboratorio sono vicini al patogeno, tanto maggiore è la possibilità di identificarlo.

Ad esempio, i tamponi faringei riflettono principalmente le condizioni delle vie respiratorie superiori. Se sospettiamo un'infezione da virus dell'influenza A, B, ecc., possiamo effettuare un tampone faringeo.

Tuttavia, per le infezioni delle vie respiratorie inferiori, come le infezioni polmonari, è opportuno raccogliere il liquido di lavaggio broncoalveolare (BALF). Tuttavia, la raccolta del BALF può essere invasiva e non adatta ai pazienti ambulatoriali o a rischio. In alternativa si può ricorrere all'espettorazione profonda.

1. A cosa devo prestare attenzione quando raccolgo campioni di espettorato?

L'espettorato, per sua stessa natura, non è un campione molto valido. Poiché il processo di tosse nei campioni di espettorato è interferito dalla normale flora dell'orofaringe, questi possono contenere molta flora normale, che può confondere i veri patogeni.

Per evitare questa confusione, in genere è necessario sciacquare la bocca e lavarsi i denti prima di raccogliere l'espettorato. Grazie a questa operazione è possibile ridurre al minimo l'interferenza con la flora normale.

Figura 1 Immagine originale protetta da copyright, nessuna autorizzazione alla ristampa

Poi dobbiamo tossire profondamente per produrre catarro. Il catarro espulso con la tosse dalle parti più profonde può riflettere meglio la situazione dei patogeni delle vie respiratorie inferiori. Se ci limitiamo a tossire delicatamente, la maggior parte del catarro espulso proviene dalle vie respiratorie superiori e non contiene i veri patogeni delle vie respiratorie inferiori. A volte la capacità del paziente di espettorare catarro è relativamente scarsa e ha bisogno dell'aiuto di parenti o assistenti che gli diano dei leggeri colpetti sulla schiena per aiutarlo a espettorare il catarro in profondità nelle vie respiratorie.

2. Come vengono eseguiti lo striscio dell'espettorato, la coltura dell'espettorato e il test di sensibilità ai farmaci?

Striscio dell'espettorato:

Dopo aver raccolto il campione di espettorato, si esegue uno striscio semplice sul campione e poi si esegue la colorazione di Gram o la colorazione acido-resistente. Dopo la colorazione di Gram e l'ingrandimento 1000 volte al microscopio, possiamo vedere se al suo interno sono presenti globuli bianchi e agenti patogeni. La colorazione acido-resistente può rivelare sia il Mycobacterium tuberculosis che i micobatteri non tubercolari.

In parole povere, se nel campione sono presenti pochissimi globuli bianchi, significa che in realtà il campione potrebbe non provenire dal sito dell'infezione delle vie respiratorie inferiori; se si osserva un gran numero di cellule epiteliali, ciò indica che il campione proviene dalle vie respiratorie superiori o dalla cavità orale.

In generale, un campione di espettorato emesso con la tosse contenente più di 25 globuli bianchi/LP e meno di 10 cellule epiteliali/LP può spesso essere considerato un campione di espettorato qualificato e il passo successivo sarà quello di identificare i patogeni in esso contenuti.

Coltura dell'espettorato:

Il personale di laboratorio inoculerà i campioni di espettorato in diversi terreni di coltura, consentendo ai microrganismi patogeni in essi contenuti di crescere in colonie visibili in condizioni adeguate.

Alcuni batteri crescono più velocemente, come lo Streptococcus pneumoniae, l'Haemophilus influenzae, la Klebsiella pneumoniae, la Pseudomonas aeruginosa, l'Acinetobacter baumannii e altri batteri comuni, la maggior parte dei quali può crescere entro 24 ore. Se più batteri crescono contemporaneamente, è necessario isolare le singole colonie per ulteriori analisi. Il laboratorio identifica le colonie coltivate, ad esempio utilizzando metodi biochimici o spettrometria di massa, per determinare di che tipo di batteri si tratta. Viene poi eseguito un test di sensibilità ai farmaci per individuare a quale classe di farmaci antimicrobici questi batteri sono sensibili, per poi utilizzarli nella fase successiva del trattamento. L'intero processo dura circa 3-5 giorni. Per alcuni batteri a crescita rapida, il rapporto di ispezione può essere ottenuto in 2-4 giorni.

Alcuni patogeni crescono lentamente, come l'Aspergillus fumigatus, che può impiegare dai 2 ai 5 giorni, mentre il Mycobacterium tuberculosis e il Mycobacterium avium possono impiegare dai 20 ai 40 giorni. Solo dopo aver osservato le colonie è possibile identificarle e sottoporle a test per la sensibilità al farmaco.

Ecco perché i tempi per ricevere i referti dei test di identificazione della coltura e di sensibilità ai farmaci non sono uniformi quando eseguiamo test diversi.

Test di sensibilità ai farmaci:

Il test di sensibilità ai farmaci consiste nel coltivare un batterio e ritenere che sia un microrganismo patogeno; successivamente, dobbiamo utilizzare test in vitro per verificare a quali antibiotici questo batterio o fungo è sensibile.

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Naturalmente non tutti i microrganismi patogeni rilevati richiedono un test di sensibilità ai farmaci. Poiché alcuni batteri sono generalmente sensibili a molti antibiotici, non è necessario effettuare questo tipo di test di sensibilità ai farmaci in modo specifico. Non esistono metodi standard per testare la sensibilità ai farmaci di alcuni batteri oppure le condizioni sono troppo difficili perché i laboratori possano eseguirli. Questi batteri non forniranno resoconti sulla sensibilità ai farmaci, ma solo risultati di identificazione. I medici possono scegliere i farmaci antimicrobici in base alle linee guida o al consenso degli esperti.

Nella pratica clinica, la raccolta di campioni di espettorato per lo striscio, la coltura dell'espettorato e il test di sensibilità ai farmaci è il metodo più comune per diagnosticare l'eziologia delle infezioni polmonari nel reparto di medicina respiratoria. La raccolta corretta dei campioni di espettorato, l'esecuzione attiva degli esami pertinenti e la selezione razionale dei farmaci appropriati sono misure fondamentali per promuovere la rapida guarigione della malattia.