Un'immagine all'inizio, tutto il contenuto dipende dall'editor: applicazione della routine del sangue nella citometria a flusso

Citometria a flusso?

Non ne ho mai sentito parlare!

Ne hai sentito parlare, ma non sai esattamente di cosa si tratta?

Molti potrebbero non averne familiarità, ma va bene, diamo prima un'occhiata a un'immagine.

Le due aree rosse nell'immagine sopra sono state ottenute con questa tecnologia. Ok, veniamo al dunque.

La citometria a flusso è una tecnica biologica utilizzata per contare e selezionare minuscole particelle sospese in un fluido . Questa tecnica può essere utilizzata per analizzare in modo continuo molteplici parametri delle singole cellule mentre scorrono davanti a un rilevatore ottico o elettronico. La citometria a flusso è una tecnologia che rileva i segnali fluorescenti di singole cellule o di altre particelle biologiche in sospensione per ottenere un'analisi quantitativa e un ordinamento cellula per cellula ad alta velocità. Presenta le caratteristiche di forte specificità, elevata sensibilità, elevata velocità e può essere analizzato e ordinato. I segnali di rilevamento della citometria a flusso si dividono in due tipologie: segnali luminosi diffusi e segnali fluorescenti.

1. Segnale luminoso diffuso

Interludio: quando un fascio di luce monocromatica parallela illumina un campione liquido, la maggior parte della luce attraversa la soluzione e una piccola parte viene diffusa a diverse angolazioni a causa della collisione tra i fotoni e le molecole del materiale, che modifica la direzione del movimento dei fotoni. Questa luce è chiamata luce diffusa.

I segnali luminosi diffusi si dividono in luce diffusa in avanti e luce diffusa lateralmente. La prima è anche detta luce diffusa a piccolo angolo, mentre la seconda è detta luce diffusa a 90°.

La dispersione in avanti (FSC) è il segnale luminoso disperso raccolto nella direzione anteriore. In generale, l'FSC può riflettere la dimensione delle celle. Se l'FSC è forte, le celle sono più grandi e viceversa. Tuttavia, quando l'obiettivo di rilevamento sono cellule non sferiche (come globuli rossi, sperma, ecc.), a causa dell'orientamento non uniforme delle cellule nel sistema di flusso del fluido, è facile che le FSC dello stesso tipo di cellule siano notevolmente diverse durante il rilevamento laser. Ciò richiede un'attenzione particolare.

La dispersione laterale (SSC) è il segnale luminoso disperso e raccolto lateralmente. L'SSC è più sensibile all'indice di rifrazione della membrana cellulare, del citoplasma e della membrana nucleare e la sua intensità è correlata alla struttura fine e alle proprietà delle particelle all'interno della cellula. In genere, più organelli e particelle ha una cellula, più forte è il suo SSC.

Utilizzando il test a doppio parametro FSC/SSC, è possibile identificare diverse sottopopolazioni cellulari dai campioni senza l'aggiunta di coloranti fluorescenti. Il metodo più classico consiste nell'utilizzare i doppi parametri FSC/SSC per dividere i leucociti del sangue periferico umano in tre sottopopolazioni: linfociti, monociti e granulociti (come mostrato nella figura sottostante). I linfociti hanno FSC e SSC relativamente piccoli, i monociti hanno FSC relativamente grandi e SSC medi, e i granulociti hanno FSC e SSC relativamente grandi. (Non hai familiarità? Le tre categorie sono chiare, vero? In effetti, molti nuovi arrivati ​​probabilmente non le capiscono perché molti posti sono stati eliminati.)

2. Segnale di fluorescenza

Esistono anche due tipi di segnali fluorescenti. Uno è il segnale fluorescente emesso dalla fluorescenza della cellula stessa sottoposta a irradiazione laser, chiamato autofluorescenza cellulare; l'altro è l'etichettatura artificiale delle cellule con specifici coloranti fluorescenti, come anticorpi monoclonali marcati con coloranti fluorescenti che si legano specificamente agli antigeni corrispondenti sulla membrana cellulare, sul citoplasma e sulla membrana nucleare. Questi coloranti fluorescenti generano segnali tramite eccitazione laser. L'intensità del segnale di fluorescenza riflette il livello di espressione degli antigeni cellulari. Attraverso il segnale di fluorescenza possiamo analizzare le sottopopolazioni e le funzioni delle cellule.

3. Diagramma di dispersione (un po' come il mosaico a cui hai giocato)

(1) Diagramma di dispersione delle cellule del sangue: utilizzando la luce diffusa in avanti (FSC), la luce diffusa laterale (SSC), la fluorescenza laterale (SFL) e la larghezza del segnale della luce diffusa in avanti (FSCW), l'analizzatore delle cellule del sangue visualizza le informazioni sulle cellule attraverso la posizione e la densità dei punti di dispersione sul piano del quadrante. Sulla base dei quattro segnali, vengono generati vari grafici di dispersione per classificare e contare i globuli bianchi, i globuli rossi nucleati, i reticolociti e le piastrine, nonché per rilevare cellule anomale e cellule immature.

(2) Canale di rilevamento WDF

Attraverso questo canale possiamo distinguere quattro tipi di sottotipi di leucociti nel sangue periferico: linfociti, monociti, neutrofili ed eosinofili. Inoltre, possiamo ottenere alcuni indizi sulla presenza di cellule anomale, utili per un nuovo esame.

(3) Canale di rilevamento WNR

La funzione principale di questo canale è quella di distinguere i basofili.

Finalmente abbiamo i risultati della classificazione dei globuli bianchi in cinque categorie, ma se riscontrate dei risultati anomali, ricordatevi di richiedere un nuovo esame!

Ok, ci vediamo la prossima volta!